Ящур — опасная остро протекающая высококонтагиозная вирусная болезнь многих видов животных, характеризующаяся лихорадкой, слюнотечением, афтозно-эрозийными поражениями слизистой оболочки языка и ротовой полости, кожи носового зеркальца, конечностей, молочных желез, миокардитом и миозитом при высокой смертности молодняка первых дней жизни. Ящуром от животных может заразиться и человек.
Историческая справка. Впервые ящур описал и указал на его заразительность в Италии в 1546г. Д.Фракасторо. В 17 и 18 вв. ящур, который часто протекал злокачественно и его часто смешивали с чумой крупного рога того скота, был установлен во многих странах Европы. В России ящур известен с первой половины 19 века. В 1897 г. Леффлер и Фрош открыли возбудителя болезни — фильтрующий вирус.
В настоящее время ящур встречается во многих странах Европы, Азии, Африки и Южной Америки. Последняя вспышка ящура в России была зафиксирована в 2005году в Амурской области, Хабаровском и Приморском краях в результате заноса его через территорию Монголии из Китая, где была эпизоотия ящура типа Азия-1.
Экономический ущерб от ящура складывается из потерь в результате падежа главным образом молодняка (телят, поросят, ягнят), снижения на 50-75% молочной продуктивности коров, уменьшения живого веса больных животных и абортов. Особенно громадные потери несет проведение карантинных мероприятий. Так, ящур типа О на Тайване в 1997году, где было более 6 тысяч ящурных очагов и было уничтожено свыше 4млн. свиней, принес общий экономический ущерб около 10 млрд. долларов США. В Великобритании аналогичная эпизоотия ящура в 2001году, когда было зарегистрировано 2030 очагов ящура и уничтожено свыше 4млн голов животных, ущерб составил около 12 млрд. долларов. В России в 2005 году из-за ящурных очагов типа Азия-1 в Амурской области, Хабаровском и Приморском краях прямой экономический ущерб составил более 45 млн. рублей.
Возбудитель болезни вирус относится к семейству Пикорнавиридэ, роду Афтовирус. Вирусная частица состоит из рибонуклеиновой кислоты (РНК), окруженной периферической белковой капсидой, включающей 32 капсомера. В организме больного животного вирус в наибольшей концентрации находится в эпителии стенок афт и в лимфе в первые 24-48часов болезни. Его можно, но в значительно меньших концентрациях, обнаружить в слюне, в крови, моче и фекалиях. Причем вирус из афт становится заразительным уже в разведении 1:100-200млн., а из фекалий только в разведении 1:100. Известны 7 типов вируса: О,А,С, Азия-1, САТ-1, САТ-2, САТ-3 и множество их вариантов. Сейчас в мире имеют преимущественное распространение типы О,А, Азия-1 и САТ-2. Животные, переболевшие ящуром одного типа, могут повторно заболеть в случае заражения вирусом другого типа.
Вирус ящура сравнительно устойчив к воздействию факторов внешней среды. На поверхности предметов, загрязненных выделениями больных ящуром животных, вирус сохраняется 150, в навозе-до 168, в навозной жиже-до 40, в сточных водах-до 103дней. В крови рогатого скота и свиней (после быстрого замораживания мясных туш) вирус остается активным 40дней. В охлажденном молоке сохраняется до 47дней, в свежем молоке при температуре 37 градусов погибает через 12 часов, в то же время в кислом молоке и при приготовлении сыра вирус быстро погибает. Шерстный покров животных и одежда людей вирус сохраняет 28-40 дней. При правильно проведенном биотермическом обезвреживании навоза вирус погибает через 10-15 дней. Нагревание до 60 градусов убивает вирус через 15минут, а при 80-100 градусах он разрушается фактически моментально. Лучшим дезинфицирующим средством для уничтожения вируса ящура является использование 2-3%-ного горячего раствора едкого натрия и 1%-ного раствор формальдегида.
Эпизоотологические данные. Ящуром болеют все виды парнокопытных животных. Наиболее восприимчивы к ящуру крупный рогатый скот, затем по убывающей свиньи, овцы, козы и олени, менее чувствительны буйволы, верблюды. Описаны случаи заражения ящуром собак и кошек через молоко больных ящуром коров. Птица и лошади к ящуру не восприимчивы. Из лабораторных животных ящуром болеют морские свинки, кролики, мыши.
Ящуром болеют животные любого возраста, однако легче заражается и более тяжело переболевает молодняк в возрасте до 2-3месяцев.
Источником возбудителя инфекции являются инфицированные, больные животные, а также животные — реконвалесценты, которые длительное время могут быть вирусоносителями.
Основные пути распространения инфекции. Вирус ящура передается в основном алиментарным и аэрогенным путями. В хозяйства возбудитель ящура заносится при поступлении на ферму ЛПХ, КФХ больных или переболевших животных; при контактах с больными (переболевшими) животными, в том числе дикими; при пастьбе, водопое, перегонах; с инфицированными кормами, водой, а также при использовании молока от больных животных; при завозе продуктов убоя больных (переболевших) животных (использование в корм необезвреженных кухонных отходов); распространяется с ветром (мелкие частицы корма, пораженной ткани, слюны, пыли и т.п.), с инфицированными (загрязненными) предметами ухода; одеждой и обувью ухаживающего персонала, транспортными средствами.
Патогенез. Вирус, попадающий в организм животного через пищеварительный тракт или наружные покровы, через слизистые оболочки проникает в клетки эпителия, где происходит его фиксация и размножение. Размножение вируса вызывает ответную реакцию организма в виде серозного воспалительного процесса. Происходит образование одной или двух первичных афт, которые обычно владельцами животных не замечаются. Общее состояние животного в этой фазе болезни обычно не изменяется. Спустя 24 часа у большинства животных болезнь переходит во вторую фазу. Из мест первичной локализации вирус после размножения поступает в кровь, а затем во все органы и ткани. Генерализация процесса вызывает у животного острую лихорадочную реакцию.
Защитные средства, имеющиеся в организме животного, нейтрализуют вирус в крови в большинстве органов и тканей, но в связи с тем, что эпидермис относительно слабо снабжается кровью, а значит и антителами, вирус начинает в нем размножаться. В результате интенсивного размножения вируса в эпидермисе возникают множественные вторичные афты в ротовой полости, в области межкопытной щели и венчике конечностей, на коже сосков вымени (генерализованный процесс). Вирус ящура может размножаться в сердечной и скелетной мускулатуре.
Течение и симптомы болезни. У всех животных в естественных условиях ящур обычно протекает остро. У взрослых животных иногда наблюдается абортивное течение ящура, сопровождающееся кратковременным повышением температуры тела и быстро наступающим выздоровлением. У взрослых животных ящур обычно протекает доброкачественно. Принято различать типичную и атипичную формы (злокачественная, абортивная и латентная) ящура.
У крупного рогатого скота инкубационный (скрытый) период 1-3 дня, но может быть от 12 часов до 7 дней, доходя в отдельных случаях до 14-21 дня.
При доброкачественном течении сначала отмечаем уменьшение аппетита, вялость жвачки, увеличенное слюноотделение. Потом у больного животного наблюдается повышение температуры тела до 40,5-41,5 градусов, пульс учащается, состояние животного становится угнетенным, наблюдается отказ от корма и отсутствие жвачки. Ко второму и третьему дню болезни на внутренней поверхности верхней и нижней губы, на беззубом крае нижней челюсти, на языке и слизистой щек появляются афты . Практически одновременно у некоторых животных образуются афты в области межкопытной щели и на коже вымени. При ящуре часто происходит поражение всех четырех конечностей, но бывают случаи, когда поражаются только две передние или две задние.
В начале болезни афты бывают величиной с просяное зерно, потом они сливаются и увеличиваются до размеров горошины или грецкого ореха. Спустя 12-24 часа стенки у афт разрываются, оставляя после себя свежие эрозии . В этот момент температура тела у животного снижается до нормы. При осмотре больного животного отмечаем обильное слюнотечение, в углах рта образуется пенистая масса и характерное причмокивание. Образовавшиеся эрозии заживают через 6-8дней, но в том случае, когда процесс осложняется вторичной инфекцией, заживление эрозий затягивается до 2-3недель.
На конечностях ящурные поражения начинаются с того, что на коже венчика и мякишей, в области межкопытной щели, появляются болезненные и горячие припухлости, из-за которых у животного появляется хромота. Если происходит поражение всех конечностей, то такие животные лежат и его с большим трудом можно поднять. В дальнейшем на месте образовавшихся припухлостей появляются афты, которые вскоре лопаются с выходом наружу содержимого в афтах экссудата. При своевременном, правильно начатом лечении и содержании животных на сухой подстилке, эрозии заживают в течение 5-8дней. Если афтозные поражения имеют обширный характер, то у животного развивается флегмона венчика, глубокий гнойный пододерматит, гнойный артрит, вплоть до спадения рогового башмака.
У лактирующих коров часто наблюдается на коже вымени, сосках образование афт разнообразной величины. После вскрытия афт остаются эрозии. Воспалительный процесс имеет тенденцию распространятся на верхушку соска и на слизистую оболочку соскового канала. Все эти воспалительные процессы приводят к нарушению функции пораженной четверти вымени, что проявляется изменением состава молока, молоко становится слизистым, приобретает кислую реакцию и горьковатым на вкус. В результате закупорки соскового канала фибринозными, казеиновыми пробками и струпьями, приводящими к затруднению выхода молока, у коров развивается мастит. У лактирующих коров молочная продуктивность снижается до 75%. Молочная продуктивность, при своевременно и правильно начатом лечении восстанавливается у коров медленно, иногда на это уходит несколько месяцев. У отдельных взрослых животных отмечаем расстройство функции пищеварительного тракта, сопровождающееся поносом.
У телят до 2-месячного возраста ящурная инфекция обычно протекает в безафтозной форме, но с симптомами острого гастроэнтерита. Если своевременно не принять необходимые лечебные меры, заболевание закончится падежом телят. У отдельных телят в результате осложнения секундарной микрофлорой ящур осложняется бронхопневмонией.
При доброкачественном течении ящур продолжается в течение 8-10дней. Если к ящуру присоединяются осложнения, то болезнь растягивается на 25 и более дней.
Осложнения у больных ящуром животных возникают в результате присоединения к ящурному процессу возбудителей вторичных инфекций: стрептококков, стафилококков, в результате чего у больных животных появляются гнойные пододерматиты, флегмоны венчика, эндометриты, маститы, нефриты, бронхопневмония и т.д. Осложнения в основном развиваются у животных, имеющих слабую резистентность организма. Сам по себе вирус ящура может привести к развитию расстройств в деятельности сердечнососудистой системе на почве дистрофии миокарда и нарушения обмена веществ.
Бывают случаи, когда ящур может иметь злокачественное течение. При злокачественной форме ящура, когда болезнь вначале протекает с типичными для ящура признаками, на 8-12-й день (в стадии выздоровления) у животного внезапно наступает резкое ухудшение состояния животного. У животного отмечаем слабость, угнетение, пульс учащается до 120-140 ударов в минуту, животное отказывается от корма, прекращается жвачка. У отдельных животных отмечаем паралич задних конечностей. Смерть при злокачественной форме болезни наступает от остановки сердца.
В отдельных случаях злокачественное течение ящур приобретает с самого начала болезни, когда температура тела повышается на 0,5-1 градус, на фоне слабых афтозных поражений при одновременном поражении вымени. Заболевание протекает с потерей аппетита, резким угнетением и расстройством сердечной деятельности. Летальность при этом у животных составляет 20-50%.
Свиньи. У свиней инкубационный (скрытый) период чаще всего 24-48 часов, но иногда затягивается до 8 дней. Среди свиней заболевание протекает остро, с высокой смертностью молодняка. Болезнь характеризуется лихорадкой, угнетением и уменьшением аппетита. Поражаются у свиней в основном конечности, появляется хромота, у отдельных свиней отмечаем спадение копытец. Афты появляются на пятачке, молочных железах, изредка в ротовой полости. После разрыва афт остаются эрозии. У взрослых свиней заболевание длится 8-25 суток. У поросят ящур протекает в септической форме, приводя к падежу 60-100% животных уже в первые дни болезни. При тяжелом течении болезни происходят кровоизлияния в слизистых оболочках пищеварительного тракта, легких и почках, под серозными оболочками.
У овец инкубационный (скрытый) период длится 2-3дня. Болезнь протекает менее остро, чем у крупного рогатого скота. Редко отмечаем такой характерный для ящура признак, как слюнотечение. Афты мелкие, рано вскрываются и при отсутствии осложнений быстро заживают. В связи с поражением конечностей (афты в области межкопытной щели и венчика, а также пододерматитов) у овец возникает хромота. При массовом распространении ящура в отаре у части овец выявляем характерный симптомокомплекс: афтозно-эрозийные изменения на губах, языке, деснах, беззубом крае верхней челюсти, на конечностях и вымени, повышение температуры тела (до 41,5 град.), снижение аппетита, периодическое прекращение жвачки, угнетение. Нередко бывает, что ящур у овец в отарах протекает со слабыми признаками или эти признаки совсем отсутствуют, в результате ящур остается не диагностируемым. Овцы при таком развитии ящурной инфекции могут оставаться вирусоносителями в течении нескольких месяцев, выполняя роль скрытого источника вируса. У ягнят ящур чаще протекает в форме септицемии и сопровождается большим падежом.
У коз инкубационный (скрытый) период продолжается от 2 до 8дней. Протекает менее остро, чем у крупного рогатого скота. В первые дни болезни отмечаем лихорадку, угнетение, потерю аппетита, поражение ротовой полости и конечностей, которая приводит к хромоте. Рот у больных коз закрыт, отмечаем скрежет зубами. Обильное слюнотечение отсутствует. Часто происходит поражение вымени. Выздоровление обычно наступает в течение 10-14 дней. Козы являются более резистентными к ящуру, однако иногда и у них он протекает злокачественно.
У оленей при ящуре отмечаем понос, поражение слизистых оболочек ротовой полости и конечностей, которые часто осложняются некробактериозом. При отсутствии осложнений выздоровление оленей наступает через 10-12 дней.
Патологоанатомические изменения. Находим афты и эрозии в ротовой полости, иногда на слизистой оболочке пищевода и в преджелудках у жвачных. У поросят, ягнят и телят при вскрытии обнаруживаем геморрагическое воспаление кишечника, дегенеративные изменения в мышце сердца (тигровое сердце).
При злокачественной форме течения ящура в сердечной мышце находим тяжелые поражения. Сердечная мышца становится бледной и дряблой, на разрезе выступают серовато-красноватые пятна и казеозно перерожденные фокусы серо-белого цвета различной величины. Под эпикардом и эндокардом находим кровоизлияния. В печени, почках и скелетных мышцах — дегенеративные изменения.
Диагноз как при всех инфекционных заболеваниях ставится комплексно с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков болезни, патологоанатомических изменений и обязательных результатов лабораторных исследований.
Для лабораторного исследования направляют стенки и содержимое свежих афт (лимфу), пробы крови в момент лихорадки у животных, лимфатические узлы области головы, пищеводно-глоточная слизь и пробы сывороток крови (не ранее 14 суток после появления клинических признаков). Отобранные материалы помещают в закрытые стерильные флаконы, замораживают или транспортируют в консервирующей жидкости (равные объемы нейтрального глицерина и 0,8% раствора хлористого натрия) в термоемкостях со льдом (хладагентом) при строгом соблюдении мер предосторожности (безопасность работы с микроорганизмами 1-2 групп патогенности (опасности). Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3. 1285-03).
Материалы для исследования направляют с нарочным с сопроводительным письмом с подробным описанием эпизоотической ситуации в хозяйстве (населенном пункте).
Лабораторная диагностика ящура основывается на выделении и идентификации вируса ящура из проб патологического материала (стенок и содержимого афт, лимфы, лимфатических узлов, проб мяса, мясных продуктов и кормов), обнаружении антигена возбудителя и вирусной РНК, установлении первичной структуры гена ВР 1 вируса ящура и выявлении постинфекционных антител (исследования в РСК,ИФА, ПЦР, РМН, вирусвыделение).
Дифференциальный диагноз. При постановке диагноза на ящур ветспециалисты должны исключить кормовые стоматиты и , везикулярный стоматит кр.р.ск., . У овец и коз исключаем контагиозный пустулезный стоматит и .
Лечение. Учитывая, что успех лечения больных ящуром животных в большей степени зависит от строгого соблюдения правил кормления и содержания, больным животным с целью не перенапряжения сердца, обеспечиваем покой. Помещения для больных животных должны быть чистыми, с достаточным количеством подстилочного материала и иметь постоянный приток свежего воздуха. С целью борьбы с обезвоживанием организма больные животные должны в сельхозпредприятиях, ЛПХ, КФХ получать вволю чистую прохладную воду. В рационе кормления должны присутствовать мягкие удобоваримые корма (трава, мучная болтушка, зимой-хороший силос, мягкое сено). Ротовая полость промывается чистой водой с добавлением 2% уксусной кислоты, можно применять 0,1% раствор марганцовокислого калия,0,5%-раствор фурацилина. В случае сильного поражения слизистой рта применяем мазь (анестезин 2,5г; новокаин 2,5г; медный купорос 5г; рыбий жир 20г; вазелин 70г). Данная мазь ускоряет заживление эрозий и, обладая обезболивающим действием, позволяет животным принимать корм.
Конечности очищают от грязи и через каждые 1-2 дня смазывают копытца, венчик, кожу свода межкопытной щели дегтем пополам с рыбьим жиром. С этой же целью животных проводят через дезбарьеры с опилками, которые пропитываются дегтем, или через ванны с 5%-ным раствором формалина.
При тяжелом поражении конечностей (флегмоны мякиша, венчика, межпальцевой клетчатки) воспаленные участки смазывают настойкой йода. Копытца расчищаем, удаляем мертвые ткани, язвы и раны прижигаем порошком перманганата калия пополам со стрептоцидом и накладываем защитную повязку или применяем башмаки из брезента и другого плотного материала. В том случае, если ящур у животного осложняется сепсисом в результате вторичной инфекции, внутривенно вводим 0,5%-ный раствор новокаина из расчета 0,5 мл на 1кг веса животного. Применяется антибиотикотерапия, в т.ч. современными антибиотиками цефалоспоринового ряда. Для предупреждения у коров афтозного поражения вымени, доярки должны следить за чистотой рук, соблюдать правила доения коров. При афтозных поражениях на вымени применяют трипофлавино-новокаиновую мазь (трипофлавин 1г, новокаин 4г, вазелин 100г), синтомициновую эмульсию или 15% -ную прополисную мазь на вазелине.
При тяжелом течении ящура и нарушениях сердечной деятельности рекомендуется применение микстуры: настойка валерианы 10мл, настойка ландыша 15мл, бромистый калий 6г, вода дистиллированная 400мл; внутрь на один прием.
При злокачественных формах ящура больным коровам необходимо ежедневно вливать через зонд или с помощью бутылки 20-30 л мучной болтушки. Ослабленным животным неплохо давать мед по 100-200г или же поить обратом с добавлением 200-400г сахара.
Из специфических средств животным применяют цитрированную кровь реконвалесцентов или сыворотку из расчета 2мл на 1 кг веса. Эти средства эффективны, если их применять до генерализации процесса. С лечебной целью можно применять также противоящурный иммунолактон.
Иммунитет и специфическая профилактика. У впервые привитых животных иммунитет формируется к 21 дню. Вируснейтрализующие антитела в сыворотке крови появляются через 5-7 суток после инфицирования, достигая максимума через 3-4 недели и могут сохраняться около года. Коллостральные антитела у телят сохраняются 3-5 месяцев.
Для профилактической иммунизации животных применяют в зависимости от эпизоотической обстановки инактивированные моно- , би- и поливалентные вакцины по определенным схемам. Стабильный уровень поствакцинальных антител, обеспечивающих защиту взрослых животных от ящура, поддерживается в течение 6 месяцев.
Меры борьбы и профилактики. Благополучие по ящуру в РФ достигнуто благодаря реализации программы, включающей в себя слежение за эпизоотической ситуацией, контролем за перемещением животных и продуктов животного происхождения, проведения мероприятий по предотвращению заноса вируса ящура на животноводческие фермы, соблюдению режима «предприятий закрытого типа», проведение профилактической вакцинации животных в зонах высокой степени риска заноса и распространения болезни, ликвидацию больных или всех животных в очагах инфекции, строгое соблюдение системы карантинных мероприятий. При возникновении ящурного очага постановлением Губернатора области на хозяйство, населенный пункт накладывается карантин. Проводятся карантинно-ограничительные мероприятия в соответствии с инструкцией «О мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболевания животных ящуром», утвержденных Главным управлением ветеринарии МСХ СССР от 15марта 1985года.
Профилактическую вакцинацию животных осуществляют в угрожаемых зонах с последующим контролем иммунного фона. Специфическая профилактика ящура проводится с применением инактивированных вакцин производства ФГУ «ВНИИЗЖ» и ФГПУ «Щелковский биокомбинат».
Во Владимирской области в целях всевозможных ЧС по ящуру вокруг ФГУ «ВНИИЖЗ» создана 30-ти километровая буферная зона, в которую входят Собинский, Суздальский районы и г. Владимир, где проводится вакцинация всего поголовья кр.р.ск. и мелкого рогатого скота в т.ч. и находящихся в частном секторе. Ветспециалистами указанных районов осуществляется постоянный контроль за напряженностью иммунитета путем проведения мониторинговых исследований проб крови в ФГУ «ВНИИЗЖ».
К вопросу вакцинации коров следует подходить очень серьёзно, поскольку животные сельскохозяйственного назначения являются одними из главных производителей продуктов, которые мы употребляем в пищу. Главным аспектом в этой области является не защита состояния здоровья животных, а защита и забота о здоровье людей, которые употребляют в пищу продукты животноводства. Предотвратить попадание мяса и молока от больных животных в торговую сеть и профилактировать опасные для здоровья заболевания можно своевременной вакцинацией и исследованиями животных.
Исследования проводятся на такие болезни, как лейкоз, бруцеллёз. Обязательны вакцинации против бешенства, сибирской язвы, ящура, а так же .
Бытует мнение, что лучше приобретать мясо у частников, которые не делают вакцинацию, поэтому такое мясо — экологически чистое. Однако это не так. Такое мясо, бывает даже очень опасным. Частные фермеры, так же как и владельцы животноводческих комплексов обязаны проводить профилактические мероприятия — вакцинации и исследования.
Виды и назначения вакцин и дозы
Комплексные моновалентные вакцины:
- Вакцина ТАУРУС имеет достаточно большую линейку от различных заболеваний инфекционного характера, таких как — ринотрахеит (ИРТ), вирусной диареи (ВД), парагрипп-3 (ПГ-3) и лептоспироз.
- КОМБОВАК, Бовилис BVD — это вакцины от инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-инцитиальной, рота- и коронавирусных инфекций.
- Ассоциированная вакцина — поливалентная вакцина,в состав входят штаммы сибирской язвы и ящура.
- Трихостав – поливалентная вакцина при профилактике трихофитии и грибковых заболеваний покрова кожи.
- Нобивак–поливалентная вакцина против бешенства.
- Так же существуют поливалентные вакцины и сыворотки на отдельный вид болезни.
В каком возрасте проводить исследования на инфекционные заболевания
- 2 месяца – проводят исследования на туберкулёз (туберкулизация);
- 4 месяца – исследуют бруцелёз;
- 6 месяцев – лейкоз.
После того, как корова начала лактацию необходимо проводить исследования два раза в год на бруцеллёз и туберкулёз.
В каком возрасте проводят плановую вакцинацию
- Вакцинацию начинают проводить у телят с раннего возраста, поскольку (это имунитет матери), который передаётся с молоком работает достаточно непродолжительный период.
- Комплексные моновалентные вакцины — телят следует вакцинировать с 1,5 месячного возраста с интервалом ревакцинации 3 недели.
- 6 месяцев – однократная вакцинация, в этом возрасте ревакцинация не требуется.
Ежегодная вакцинация обязательна, причём эти мероприятия делают за 2 недели до осеменения.
Поливалентные вакцины
- От 1,5 до 6 месяцев – вакцинация против бешенства, ящура сибирской язвы, сальмоналёза (с интервалом ревакцинации 8-12 дней), колибактериоза (ревакцинация через 2 недели), трихофитии.
- Животные старше 12 месяцев — эмфизематозный карбункул, ящур, бешенство, сибирская язва, тейлериоз, пастереллез, бруцеллез.
- Ежегодная вакцинация взрослых тёлок проводиться за 2-3 недели до осеменения.
Использовать продукты животноводства после вакцинации можно не сразу, на некоторые виды вакцин установлены свои сроки (утверждены Россельхознадзороми, ветсанэкспертизой), но если приводить примерное время, когда уже можно употреблять в пищу молоко и производить забой скота – это примерно 21-28 дней.
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины против ящура типа А. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером № 2045/Киргизия/2007-ДЕПА № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, адъюванты гидроокись алюминия с сапонином и поддерживающую среду в эффективных соотношениях. Вакцина обладает высокой иммуногенностью и способна обеспечить эффективную защиту от возбудителя инфекции ящура, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока. 11 з.п. ф-лы, 14 табл., 1 ил, 4 пр.
Рисунки к патенту РФ 2526570
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении вакцины против ящура типа А инактивированной сорбированной.
Ящур - это острое контагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных. Для него характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями молока, мяса и других видов животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность. Для обеспечения устойчивого благополучия страны по ящуру в Российской Федерации реализуется система мероприятий, приоритетными в которой являются предупреждение заноса вируса ящура на территорию, а в районах высокой степени риска - вакцинопрофилактика. В настоящее время в Российской Федерации и странах СНГ для иммунизации крупного и мелкого рогатого скота против ящура применяют, как правило, инактивированные сорбированные, а для иммунизации свиней - инактивированные эмульсионные вакцины .
Технология изготовления противоящурной вакцины из инактивированного вируса начинается с подбора производственных штаммов на основе эпизоотологического анализа динамики ящура в стране и сопредельных государствах. При создании препаратов для специфической профилактики используют соответствующие типы вируса ящура и подбирают штаммы с широким антигенным спектром внутри типа с выраженной перекрестной иммуногенностью. Штамм с широким спектром иммуногенности и удовлетворяющий требованиям региона выбирают с помощью его испытания в реакции перекрестной защиты или чаще в реакции перекрестной нейтрализации. Как правило, в качестве производственного штамма используется популяция вируса, которая в совокупности с системой и условиями промышленного культивирования обеспечивает гарантированное и высокое накопление 146S и 75S компонентов вируса и получение иммуногенной вакцины.
Кроме того, к производственному штамму предъявляются требования стабильности вируса в процессе очистки от тканевых компонентов и концентрирования, а также сохранения вируса при инактивации и длительном его хранении .
Возбудитель ящура обладает значительной антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях и зависит от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других различных факторов. Антигенная изменчивость вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков . Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью вызывают ослабление специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном. Они вызывают также затруднения штаммоспецифической диагностики.
В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.
Известны штаммы вируса ящура типа А, использовавшиеся в качестве производственных на территории СССР и РФ в течение последних 50 лет.
К ним относятся следующие штаммы: А 7 № 103, выделенный в 1962 году в Куйбышевской области; А 7 № 2, выделенный в 1965 году в Таджикской ССР; А № 717/73, выделенный в 1973 году в Ставропольском крае.
Указанные штаммы использовались для получения диагностикумов и противоящурных вакцин, применявшихся в различных регионах страны.
Однако после ликвидации ящура, вызываемого близкими им в антигенном отношении штаммами вируса, они были сняты с производства и в настоящее время поддерживаются лишь в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» .
Известна вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма A 22 № 550, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъюванта и поддерживающей среды в эффективном соотношении .
Штамм А 22 № 550 вируса ящура выделен в 1964 году в Азербайджане и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах постсоветского пространства .
Известна инактивированная сорбированная вакцина из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721 вируса ящура Aphtae epizooticae типа A, выделенного в 1999 году в Республике Грузия .
Известна инактивированная сорбированная вакцина из штамма № 1707 «Армения-98» вируса ящура Aphtae epizooticae типа А .
Вакцина против вируса ящура типа A из производственного штамма A № 1707 «Армения-98», применявшегося в буферной зоне Закавказья.
Недостатки вакцин, изготовленных из данных штаммов, состоят в недостаточной антигенной и иммуногенной активности относительно эпизоотических изолятов вируса ящура типа A, циркулирующих в настоящее время в странах Закавказья, Центральной Азии и Ближнего Востока (Турция, Иран и т.д.) ввиду имеющихся существенных антигенных отличий.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа A, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъювантов ГОА с сапонином и поддерживающую среду в соотношении, мкг:
Штамм A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП выделен в 1999 году в Республике Грузия и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ .
В качестве чувствительной биологической системы используют суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,6.
Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей используют полигексаметиленгуанидин (ПГМГ), а для инактивации вируса - аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). Для нейтрализации АЭЭИ в суспензию добавляют тиосульфат натрия.
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721 представляет собой суспензию преимущественно из 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура. В качестве адъювантов используют ГОА с сапонином.
Основной недостаток известных вакцин, в том числе и вакцины-прототипа, состоит в антигенных отличиях от изолятов вируса ящура типа A, выделенных в различные временные промежутки, и приготовленные на их основе вакцины обеспечивают эффективную защиту животных только против заражения гомологичным вирусом.
В 2003 году на территории Ирана был выделен новый изолят вируса ящура типа A, значительно отличающийся от ранее изученных штаммов этого типа. В течение 2005÷2006 гг. ящур типа A получил широкое распространение в странах Западной Азии - Иране, Турции, Саудовской Аравии и Пакистане. В феврале 2006 года ящур типа A линии Иран/05 попал во Фракию - европейскую часть Турции, которая граничит с Болгарией и Грецией. Проведение 100% вакцинации всех жвачных с применением штамма A 22 во Фракии в феврале-марте 2006 г. предотвратило распространение ящура в соседние Грецию и Болгарию, однако через 3÷4 месяца появились свежие случаи заболевания .
В связи с этим возникла необходимость получить новую вакцину против вируса ящура серотипа A из штамма А № 2045/Киргизия/2007 для обеспечения безопасности территории России и сопредельных государств от этого возбудителя.
В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вакцины противоящурной инактивированной сорбированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала инактивированных сорбированных вакцин против ящура типа A.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против ящура типа A инактивированной сорбированной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.
Предлагаемая вакцина содержит в 1 см 3 препарата: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученного предпочтительно в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в количестве не менее 3,0 мкг и целевые добавки: ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг, сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг и поддерживающую среду в количестве до 1000000,0 мкг.
Исходный вирус для получения штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП выделен в 2007 году в Республике Киргизия. Штамм получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первично трипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным культурам ВНК-21, IBRS-2 и ПСГК-30.
Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,8.
Для инактивации вируса используют АЭЭИ, который добавляют в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025÷0,05%. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия .
Полученный антиген очищают от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносят в суспензию до концентрации 0,005÷0,007% .
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура.
Количественное и качественное содержание вирусного сырья определяют методом турбидиметрии .
Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1 см 3 не менее 0,5 мкг 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.
Необходимую концентрацию 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура в предлагаемой вакцине, составляющую не менее 3 мкг в 1 см 3 готового препарата, получают путем добавления в авирулентный и очищенный антигенный материал расчетного количества адъюванта-сорбента ГОА. Оптимальным является содержание ГОА в 1 см 3 готового препарата в диапазоне от 11000,0 мкг до 15000,0 мкг.
К полученному концентрату добавляют дополнительно 10% водный раствор сапонина из расчета 1500,0 мкг на прививную дозу. Например, для оптимальной прививной дозы 2 см 3 конечная концентрация составляет 0,075%, что соответствует 750,0 мкг его содержания в 1 см 3 готового препарата.
Полученная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП в эффективном количестве.
3. Целевые добавки.
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная.
2. Активное вещество.
3. Целевые добавки.
По сравнению с вакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A в эффективном количестве.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования.
1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
3. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
4. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
5. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант-сорбент ГОА.
6. ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
7. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант сапонин.
8. Сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
9. В качестве целевой добавки вакцина содержит поддерживающую среду.
10. Поддерживающая среда в количестве до 1000000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
11. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A, ГОА, сапонин и поддерживающую среду в соотношении, мкг:
Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вируса ящура серотипа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.
Достижение технического результата от использования изобретения достигается тем, что в состав предлагаемой вакцины введен в качестве активного вещества антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серотипа A, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивающего получение противоящурной вакцины сорбированной инактивированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа A, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 является новым, ранее неизвестным . Исходный вирус для получения штамма A № 2045/Киргизия/2007 был выделен из проб афтозного материала от больной телки, поступивших в ФГУ «ВНИИЗЖ» в декабре 2007 года из Республики Киргизия (экспертиза № 2045 «Киргизия/07»). Производственный штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.
Полученный штамм депонирован 7 июля 2009 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным номером (ссылкой): производственный штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП вируса ящура типа A.
Штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП вируса ящура типа A характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические свойства
Штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу A и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура относится к серотипу A. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА, РДП и РМН.
При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа A штамма A № 2045/Киргизия/2007 индуцирует образование вирусспецифических и вируснейтрализующих антител, выявляемых в РСК в разведениях 1:80÷1:160 и в ИФА в разведениях 1:10000÷1:12000.
Антигенное родство штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A с производственным штаммом вируса ящура A 22 № 550 и штаммами, ранее выделенными на Азиатском континенте, изучено в РСК, ИФА и РМН.
Результаты исследований в РСК представлены в таблице 1. Антигенное родство (R) штамма A № 2045/Киргизия/2007 с другими вирусами ящура серотипа A составило для A/Иран/97 - 8%, A 22 /Ирак 24/64 - 28%, A/Иран/05 - 68%, A/Турция/06 - 66%, A 22 № 550 - 14%.
Результаты исследований в РМН представлены в таблице 2. Антигенное соответствие (r 1) составило для A/Иран/97 - 0,125, A 22 № 550 - 0,17, A 22 /Ирак 24/64 - 0,6, A/Турция/06 - 0,5. При значении r 1 >0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близко родственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r 1 <0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса .
Результаты исследований в ИФА представлены в таблице 3. Антигенное соответствие (r 1) составило для A 22 № 550 - 0,24, A 22 /Ирак 24/64 - 0,24, A/Иран/97 - 0,19, A/Турция/06 - 0,5. При значении r 1, равном 0,4÷1,0, полевой изолят и производственный штамм находятся в близком антигенном родстве; при значении r 1 0,2÷0,39 полевой изолят антигенно родственен производственному штамму, вакцина из производственного штамма может быть использована, если не будет найдено более родственного штамма, и при условии, что животные будут иммунизированы более 1 раза; при значение r 1 <0,2 полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из которого не приемлема для защиты от заражения полевым вирусом .
Молекулярно-генетическая характеристика
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP 1 вируса ящура типа A штамма А № 2045/Киргизия/2007 и выведена первичная структура белка VP 1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A имеет близкое филогенетическое родство со штаммами A/Иран/05 и A/Турция/06 (процент нуклеотидных различий 3,82÷4,3 и 4,46÷5,57 соответственно) и значительно отличается от вакцинного штамма A 22 № 550. Кроме того, он отличается от штаммов вируса этого типа, выделенных в 1998 г. в Армении и Турции, а также в Грузии и Иране в 1999 г. (смотри дендрограмму). Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A со штаммами вируса ящура серологического типа A составила: со штаммом A 22 № 550 - 18,15%, со штаммом A № 1707 «Армения-98» - 17,68%, со штаммом A/Турция/98 - 17,2%, со штаммом A (Грузия) 1999/ № 1721 - 18,79%, со штаммом A/Иран/99 - 17,68%.
Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A принадлежит к новой генетической линии вируса ящура серологического типа A.
Биотехнологические характеристики
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21 и IB-RS-2, и в течение 20÷24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений от 6,33 до 8,25 lg ТЦД 50 -/см 3 (таблица 4). При массированном заражении (1÷10 ТЦД/клетку) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).
Хемо- и генотаксономическая характеристика
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×10 6 Д.
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочечной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×10 6 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP 1 , VP 2 , VP 3 и VP 4 . Липопротеидная оболочка отсутствует.
Основным антигенным белком является VP 1 . В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (BP 56a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.
Физические свойства
Масса вириона составляет 8,4×10 -18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см 3 .
Устойчивость к внешним факторам
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при pH 7,2÷7,6. Сдвиги pH как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса.
Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, -облучению, высоким температурам.
Дополнительные признаки и свойства
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.
Вирулентность - вирулентен для естественно восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей.
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации.
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа A.
Для снижения его эпизоотической опасности необходима своевременная вакцинопрофилактика вновь возникающих очагов болезни, для чего необходимы актуальные высокоиммуногенные вакцины.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем признакам предлагаемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вакцины, изложенных в независимом пункте формулы.
Следовательно, заявляемая вакцина соответствует уровню патентоспособности «новизна».
Для проверки соответствия предлагаемой вакцины условию патентоспособности «изобретательский уровень» проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемой вакцины преобразований для достижения технического результата.
Следовательно, предлагаемая вакцина соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень».
Сущность изобретения пояснена в перечнях последовательностей, в которых:
SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP 1 штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A.
SEQ ID NO:2 последовательность аминокислот белка VP 1 штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A.
Сущность изобретения пояснена на дендрограмме, отражающей филогенетические взаимоотношения штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серологического типа A с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура типа A. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP 1 .
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.
Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вирус ящура типа A был изолирован из полевого материала, поступившего в ФГУ «ВНИИЗЖ» в виде эпителия афт от КРС, подозреваемого в заболевании ящуром, при проведении лабораторной диагностики этого заболевания и дифференциации его от других везикулярных болезней. При изоляции вируса использован комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов.
Биологические и вирусологические методы включали инокуляцию материала полевого изолята КРС и последующую адаптацию вируса к культурам первично трипсинизированных и перевиваемых линий клеток. Были использованы культуры клеток СП, ПСГК-30, IB-RS-2 и ВНК-21. Первичные и перевиваемые культуры клеток для постановки биопробы выращивали на соответствующих питательных средах в стационарных условиях во флаконах емкостью 50÷100 см 3 , отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1÷10 ТЦД 50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% ГЛА и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали хлороформом в отношении 1:10. После 30-минутного инкубирования при 37°C во флаконы вносили по 5÷10 см 3 поддерживающей среды и инкубировали при 37°C до появления ЦПД вируса. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000g в течение 15 минут. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК и ИФА на наличие вирусного антигена, при этом использовали набор коммерческих типоспецифических сывороток и сыворотки, хранившихся в музее штаммов ФГУ «ВНИИЗЖ».
Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 4.
Данные, приведенные в таблице 4, свидетельствуют о хорошей адаптационной активности штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A к использованным клеточным культурам.
Изолированный с помощью перечисленных методов вирус был исследован в РСК с набором диагностикумов на все типы вируса ящура, с целью идентификации типовой принадлежности.
Результаты типирования вируса в РСК представлены в таблице 5.
Приведенные в таблице 5 результаты свидетельствуют о том, что выделенный вирус относится к типу A.
Вакцину против ящура типа A инактивированную сорбированую готовят из вируса штамма A № 2045/Киргизия/2007, выращенного в суспензионной культуре клеток ВНК-21. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,8. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,001÷0,05 ТЦД 50 на клетку.
Культивирование вируса ведут при температуре 36÷37°C. Через 11÷13 часов инкубирования проводят подсчет живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15÷20%, то инкубирование продолжают еще 2÷3 часа. При достижении количества мертвых клеток 90÷95% культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S и 75S компонентов. Количество 146S+75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см 3 .
В таблицах 6, 7, 8 и 9 приведены результаты культивирования штаммов A № 2045/Киргизия/2007, A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП, A № 1707 «Армения-98-ДЕП» и A 22 № 550 вируса ящура типа A, из которых следует, что культуральные свойства перечисленных штаммов существенно отличаются по двум изученным параметрам:
1) штамм A № 2045/Киргизия/2007 имеет более короткий период репродукции (12,5 часа) по сравнению со штаммом A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП и A № 1707 «Армения-98-ДЕП» (15÷16 часов);
2) штаммы A № 2045/Киргизия/2007 и A 22 № 550 дают более высокий процент выхода иммуногенных компонентов (90,1% и 89,9% соответственно) по сравнению со штаммами A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП и A № 1707 «Армения-98-ДЕП» (61,5% и 58,1% соответственно).
Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15÷20% раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до pH 8,0÷8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025÷0,05%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12÷24 часов при 36÷37°C и pH 7,2÷7,6 с перемешиванием через 5÷6 часов в течение 3÷5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.
В теплую суспензию добавляют 10% раствор ПГМГ до концентрации 0,005÷0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.
В таблице 10 приведены результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S и 75S) компоненты вируса ящура штаммов A № 2045/Киргизия/2007 и A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП.
Приведенные в таблице 10 данные свидетельствуют о том, что иммуногенные компоненты вируса ящура штамма A № 2045/Киргизия/2007 не уступают в устойчивости к инактивации и очистке в условиях производства вирусу ящура штамма A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП. Особенно важным является тот факт, что в процессе инактивации и очистки вируса из штамма A № 2045/Киргизия/2007 не произошло существенных изменений в количестве 146S и 75S компонентов, полученных при репродукции вируса.
Полученный антиген контролируют на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность. Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в прививной дозе адсорбированной вакцины получают путем концентрирования антигена ГОА.
Расчетный объем ГОА 3% концентрации добавляют в охлажденную суспензию антигена при работающей мешалке. Перемешивание ведут в течение 30 минут. После седиментации ГОА сливают расчетный объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна быть в пределах 1,62±0,488 Р<0,01 мг/см 3 n=10, а концентрация 146S и 75S компонентов вируса ящура, по меньшей мере, 3,0 мкг/см 3 готового препарата. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10% раствор сапонина до конечной концентрации 0,05÷0,15%, что соответствует 500,0÷1500,0 мкг сапонина в 1 см 3 готовой вакцины.
Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и проводят контроль ее стерильности в соответствии с ГОСТ 28085.
Авирулентность и безвредность вакцины проверяют на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или на морских свинках.
Полученная вакцина представляют собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым белым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.
Оптимальный компонентный состав полученной адсорбат-вакцины против ящура типа A приведен в таблице 11.
Авирулентность и безвредность вакцины проверили на 5 головах КРС. Препарат вводили каждому животному под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток.
По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность. Испытание провели на 4 головах телят массой 70÷80 кг. Адсорбат-вакцину вводили подкожно в дозе 2,0 см 3 . Контрольное заражение телят проводили гомологичным штаммом вируса ящура на 28 день после вакцинации (ДПВ). Результаты исследований представлены в таблице 12.
Приведенные в таблице 12 данные показали, что заболел 1 теленок из 4 голов, 3 были защищены от генерализации процесса на 28 день после вакцинации. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных составил 4,81±0,53 log 2 .
Проведены испытания адсорбат-вакцины против ящура типа A, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мкг:
Авирулентность и безвредность полученной вакцины проверили на 5 головах КРС. Препарат вводили каждому животному под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток после заражения.
По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность. Испытание провели на 5 головах КРС массой 250÷300 кг и 5 головах телят массой 70÷80 кг. Адсорбат-вакцину вводили подкожно в дозе 2,0 см 3 . Контрольное заражение проводили гомологичным штаммом вируса ящура на 28 день после вакцинации (ДПВ) для телят и на 90 день для быков. Результаты исследований представлены в таблицах 13÷14.
Приведенные в таблицах 13÷14 данные показали, что заболел 1 бык из 5 голов, а 4 были защищены от генерализации процесса на 90 день после вакцинации а, все 5 голов телят были защищены от генерализации процесса на 28 день после вакцинации. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных на момент заражения составил 5,00±0,27 log 2 для быков и 6,20±0,63 log 2 для телят, что свидетельствует об эффективности испытанной вакцины.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемой вакцины следующей совокупности условий:
вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
Для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью приведенных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
вакцина против ящура типа A сорбированная инактивированная, изготовленная из штамма A № 2045/Киргизия/2007 в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.
Источники информации
1. Bojko A. A. Declaration sur I apparition en URSS d un type virus aphteux different des souches de type A anterieurement etudiees dans le Pays. BOIE, 1965, 64, V. 2. - P. 1075-1077.
2. Pepep X. Ящур: пер. с нем./ Г.А.Сурковой; под ред. и с предисл. П.В. Малярца. - М.: Колос, 1971. - 432 с.
3. Ящур: монография / А.Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец [и др.]. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.
4. Вирусные болезни животных / В.Р. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев [и др.]. - М.: ВНИИТИБП, 1998. - С.532-548.
5. Временная инструкция по изготовлению и контролю противоящурной концентрированной гидроокись алюминиевой формолвакцины из лапинизированного вируса A 22 . Утверждена ГУВ СССР 25.03.1971 г.
6. Промышленный регламент на производство вакцины против ящура типов A, O, C, Азия-1, Сат-1, Сат-2 и Сат-3 инактивированной сорбированной моно- и поливалентной (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21): утв. Директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 11.09.2009. - Владимир, 2009. - 216 с.
7. Промышленный регламент на производство вакцины против ящура инактивированной эмульсионной моно- и поливалентной для профилактики ящура свиней (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21): утв. Директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 11.09.2009. - Владимир, 2009. - 240 с.
8. Пат. РФ 2294760, МПК A61K 39/135, Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа A/ В.В. Михалишин, Т.Н. Лезова, А.В. Щербаков, Д.В. Михалишин, Н.С. Мамков; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 21.12.2004; опубл. 10.06.2006 г. (прототип).
9. Пат. РФ 2140452, МПК A61K 39/135, Штамм N 1707 "АРМЕНИЯ-98" вируса ящура типа A для изготовления диагностических и вакцинных препаратов/ В.М. Захаров, В.К. Спирин, А.И. Гриценко [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 15.03.1999; опубл. 27.10.1999 г.
10. Пат. РФ 2242513, МПК A61K 39/135, Штамм A (ГРУЗИЯ) 1999/ № 1721 вируса ящура типа A для изготовления диагностических и вакцинных препаратов; ФГУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 24.11.2003; опубл. 20.12.2004 г.
11. Foot-and-mouth Disease. Sitiation worldwide and major epidemiological events in 2005-2006/ K. Sumption, J. Lubroth, T. Murrai, S. De la Rocque// Empress/Focus on. - 2007. - № 1.
12. Пат. РФ 594771, МПК A61K 39/12, Средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов/ Н.А. Улупов, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий, Д.С.Жук; ВНИЯИ - Заявл. 07.05.1973; опубл. 07.07.93 г.
13. Пат. РФ 2054039, МПК A61K 39/135, Способ очистки и стерилизации культурального вируса ящура/ Т.Н. Лезова, Н.А. Улупов, В.В. Борисов, В.В. Михалишин, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий; ВНИЯИ - Заявл. 07.02.1992; опубл. 10.02.1996 г.
14. Авт.свид. СССР 784335, C12Q 1/02, Способ определения качества вирусного сырья/ А.Ф. Бондаренко; ВНИЯИ - Заявл. 04.07.1979; опубл. 20.03.2000 г.
15. Пат. 2451745 Российская Федерация, МПК A61K 39/135, Штамм A 2045/Киргизия/2007 вируса ящура Aphtae epizooticae типа A для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа A/ Е.В. Белик, В.В. Борисов, А.В. Щербаков, С.Р. Кременчугская [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 26.07.2010; опубл. 27.05.2012 г.
16. OIE. Manual of diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial animals (Mammals, Birds and Beers). - 6 th ed. - Paris, 2008. - Vol.1.- P 203÷207.
17. Selection of foot and mouth disease vaccine strains - a review/ D.J. Paton, J.F. Valacher, J. Bregman // Rev. Sci. Techn. OIE. -2005. - Vol.24, № 3. - P. 981÷993.
| Таблица 1 | |||
| Антигенный спектр штамма А № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серотипа А по данным РСК | |||
| Сравниваемые штаммы | Показатели | ||
| r 1 | r 2 | R% | |
| А/Иран/97 | 0,05 | 0,11 | 8 |
| А22/Ирак 24/64 | 0,08 | 1 | 28 |
| А/Иран/05 | 0,46 | 1 | 68 |
| А/Турция/Об | 0,59 | 0,76 | 66 |
| А22 № 550/64 | 0,02 | 1 | 14 |
| Примечание: R s: 40% - штаммы вируса ящура относятся к одному подтипу R=(%): 25÷40 - к разным подтипам. |
|||
| Таблица 4 | ||||
| Биологические свойства вируса эпизоотического штамма А № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа А | ||||
| Система репродукции вируса | Время проявления биологической активности (часы) | Количество адаптационных пассажей | Характеристика адаптированного материала | |
| Активность в РСК | Титр инфекционной активности (Ig ТЦД 50 /см 3) | |||
| СП | 20 | 3 | 1:2 | 6,5 |
| ПСГК-30 | 20 | 3 | 1:6 | 7 |
| IB-RS-2 | 24 | 4 | 1:4 | 6,33 |
| ВНК-21 | 18 | 9 | 1:12 | 7,5-8,25 |
| Таблица 5 | ||||||||||||
| Определение типа вируса в 33%-ной суспензии афтозного материала в РСК (экспертиза № 2045 «Киргизия/07») | ||||||||||||
| г/и сыворотки в рабочем разведении | Экспертиза № 2045 | Контроль | ||||||||||
| цельный | 1:2 | 1:4 | 1:8 | к/а | A/Турция/06 | О/Приморский/2000 | Азия-1 Амурский/2005 | Сат-1 | Сат-2 | Сат-3 | б/а | |
| А/Турция/06 | 4 | 4 | 3 | - | 4 | - | - | - | - | - | ||
| О/Приморский/2000 | - | - | - | - | - | 4 | - | - | - | - | - | |
| Азия-1 Амурский/2005 | - | - | - | - | - | - | 4 | - | - | - | - | |
| Сат-1 | - | - | - | - | - | - | - | 4 | - | - | - | |
| Сат-2 | - | - | - | - | - | - | - | - | 4 | - | - | |
| Сат-3 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 4 | - | |
| б/с | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| б/к | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | 4 | |
| Примечание: 4 - 100% задержка гемолиза; | ||||||||||||
| «-» - полный гемолиз; | ||||||||||||
| б/с - без сыворотки; | ||||||||||||
| б/а - без антигена; | ||||||||||||
| б/к - без комплемента | ||||||||||||
| Таблица 6 | |||||||
| Культивирование вируса ящура типа А штамма А № 2045/Киргизия/2007 в суспензии клеток ВНК-21 | |||||||
| № п/п | Доза заражения (ТЦД 50 /кл) | Титр вируса (Ig TLW 50 /CM 3) | ВСЕ (мкг/см 3) | ||||
| 1 | 2,2 | 0,1 | 18 | 2,0 | - | - | |
| 2 | 2,2 | 0,01 | 18 | - | 1,6 | - | - |
| 3 | 2,2 | 0,001 | 18 | - | 1,67 | - | - |
| 4 | 2,0 | 0,4 | 7 | 8,00 | 1,72 | 1,48 | 86,3 |
| 5 | 1,2 | 1,1 | 9,5 | 8,00 | 1,67 | 1,55 | 93,1 |
| 6 | 3,8 | 0,01 | 15 | 7,75 | 2,89 | 2,64 | 91,4 |
| Таблица 7 | |||||||
| Культивирование вируса ящура типа А штамма А (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП в суспензии клеток ВНК-21 | |||||||
| № п/п | Концентрация клеток (млн/см 3) | Доза заражения (ТЦД 50 /кл) | Длительность репродукции (часы) | ВСБ (мкг/см 3) | 146S+75S компоненты (мкг/см 3) | % выхода 146S+75S компонентов | |
| 1 | 2,5 | 1,5 | 14,0 | 8,25 | 2,93 | 1,72 | 58,7 |
| 2 | 2,5 | 1,2 | 15,0 | 8,50 | 3,12 | 1,80 | 57,7 |
| 3 | 3,0 | 1,2 | 17,0 | 8,00 | 2,06 | 1,33 | 64,6 |
| 4 | 2,6 | 1,1 | 15,5 | 8,25 | 2,71 | 1,83 | 67,5 |
| 5 | 2,3 | 1,0 | 16,5 | 7,50 | 2,38 | 1,27 | 53,4 |
| 6 | 2,8 | 1,0 | 14,5 | 7,75 | 2,27 | 1,49 | 65,6 |
| 7 | 2,7 | 0,6 | 16,0 | 7,50 | 2,06 | 1,34 | 65,0 |
| 8 | 3,1 | 0,05 | 18,0 | 7,75 | 2,31 | 1,19 | 51,5 |
| 9 | 3,5 | 0,001 | 20,0 | 7,25 | 2,54 | 1,76 | 69,3 |
| Таблица 8 | |||||||
| Культивирование вируса ящура типа А штамма А № 1707 «Армения-98-ДЕП» в суспензии клеток ВНК-21 | |||||||
| № п/п | Концентрация клеток (млн/см 3) | Доза заражения (ТЦД 50 /кл) | Длительность репродукции (часы) | Титр вируса (Ig ТЦД 50 /см 3) | ВСБ (мкг/см 3) | 146S+75S компоненты (мкг/см 3) | % выхода 146S+75S компонентов |
| 1 | 2,5 | 1,5 | 14,5 | 8,00 | 3,30 | 2,20 | 66,8 |
| 2 | 2,5 | 1,1 | 16,0 | 8,00 | 2,29 | 1,33 | 58,2 |
| 3 | 2,5 | 1,0 | 16,5 | 7,75 | 2,24 | 1,21 | 54,1 |
| 4 | 2,6 | 0,91 | 14,5 | 8,00 | 2,53 | 1,52 | 60,1 |
| 5 | 2,6 | 0,5 | 15,5 | 7,75 | 1,73 | 0,89 | 51,5 |
| Таблица 9 | |||||||
| Культивирование вируса ящура типа А штамма А22 № 550 в суспензии клеток ВНК-21 | |||||||
| № п/п | Концентрация клеток (млн/см 3) | Доза заражения (ТЦД 50 /кл) | Длительность репродукции (часы) | Титр вируса (Ig TЦД/cм 3) | ВСБ(мкг/см 3) | 146S+75S компоненты (мкг/см 3) | % выхода 146S+75S компонентов |
| 1 | 2,5 | 1,5 | 13 | 8,00 | 2,48 | 2,19 | 88,3 |
| 2 | 2,6 | 1,0 | 12 | 7,25 | 1,17 | 1,04 | 88,8 |
| 3 | 2,7 | 1,0 | 11 | 7,75 | 2,00 | 1,83 | 91,6 |
| 4 | 2,4 | 0,8 | 14 | 8,00 | 1,78 | 1,48 | 89,3 |
| 5 | 2,4 | 0,5 | 12 | 7,50 | 1,34 | 1,26 | 94,3 |
| 6 | 3,0 | 0,05 | 13 | 7,25 | 2,06 | 1,80 | 87,2 |
| Таблица 10 | ||||
| Сравнительные данные по устойчивости штамма вируса ящура А (Грузия) 1999/ № 1721 и штамма А № 2045/Киргизия/2007 к инактивации АЭЭИ и стерилизующей очистке ПГМГ | ||||
| Штамм | после культивирования | после инактивации и очистки | ||
| ВСБ м кг/мл | 146S+75S м кг/мл | ВСБ мкг/мл | 146S+75S мкг/мл | |
| А № 2045/Киргизия/2007 | 3,12 | 1,80 | 2,69 | 1,93 |
| А (Грузия) 1999/ № 1721 n=5 | 2,64±0,19 | 1,59±0,2 | 2,35±0,11 | 1,53±0,12 |
| +- | 0,48 | 0,21 | 0,34 | 0,4 |
| Таблица 11 | |||
| Оптимальный компонентный состав вакцины против ящура типа A инактивированной сорбированной | |||
| Ингредиенты | Количество (мкг/1 cм 3) | ||
| Минимум | Рекомендуемые | Максимум | |
| Авирулентный и очищенный антигенный материал в виде иммуногенных (146S и 75S) компонентов вируса ящура типа А штамма А № 2045/Киргизия/2007 | 3,0 | 3,0 | >3,0 |
| ГОА | 11000,0 | 12000,0 | 15000,0 |
| Сапонин | 500,0 | 750,0 | 1500,0 |
| Поддерживающая среда | До 1000000,0 | До 1000000,0 | До 1000000,0 |
| Таблица 12 | |||||
| № п/п | Титр BHA log 2 против A № 2045/Киргизия/2007 на ДПВ | Наличие генерализации | |||
| 7 | 14 | 21 | 28 | ||
| 1 | 5,25 | 6,25 | 5,25 | 5,00 | - |
| 2 | 4,50 | 6,50 | 6,00 | 6,25 | - |
| 3 | 5,25 | 6,25 | 5,75 | 4,00 | + |
| 4 | 3,75 | 6,50 | 6,00 | 4,00 | - |
| M±m | 4,69±0,36 р<0,001 | 6,38±0,07 р<0,001 | 5,75±0,18 р<0,001 | 4,81±0,3 р<0,005 | 1/4 |
| Таблица 13 | ||||||||||
| Результаты исследования адсорбированной вакцины против ящура типа А из штамма А № 2045/Киргизия/2007 на быках | ||||||||||
| № п/п | Наличие генерализации | |||||||||
| 7 | 14 | 21 | 28 | 35 | 56 | 77 | 83 | 90 | ||
| 1 | 5,75 | 6,00 | 5,25 | 5,75 | 5,25 | 4,50 | 5,25 | 5,25 | 5,50 | + |
| 2 | 7,00 | 6,25 | 5,50 | 6,50 | 5,50 | 4,75 | 5,00 | 5,25 | 5,00 | + |
| 3 | 7,50 | 7,00 | 7,25 | 7,00 | 5,75 | 4,75 | 5,00 | 5,25 | 5,50 | - |
| 4 | 5,25 | 6,00 | 5,50 | 5,25 | 5,50 | 5,00 | 3,50 | 4,50 | 4,00 | + |
| 5 | 7,75 | 6,25 | 5,00 | 5,25 | 4,75 | 3,75 | 3,50 | 5,25 | 5,00 | + |
| M±m | 6,65±0,49 | 6,30±0,18 | 5,70±0,40 | 5,95±0,35 | 5,35±0,17 | 4,55±0,22 | 4,45±0,39 | 5,10±0,15 | 5,00±0,27 | 4/5 |
| р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | р<0,001 | ||
| Таблица 14 | |||||
| Результаты исследования адсорбированной вакцины против ящура типа А из штамма А № 2045/Киргизия/2007 на телятах | |||||
| № п/п | Титр ВНА log 2 против А № 2045/Киргизия/2007 на ДПВ | Наличие генерализации | |||
| 7 | 14 | 21 | 28 | ||
| 1 | 7,00 | 6,00 | 6,50 | 6,50 | - |
| 2 | 7,75 | 6,00 | 6,00 | 7,25 | - |
| 3 | 6,75 | 6,00 | 5,00 | 6,50 | - |
| 4 | 7,50 | 6,75 | 4,5 | 3,75 | - |
| 5 | 8,00 | 6,25 | 6,00 | 7,00 | - |
| M±m | 7,4±0,23 р<0,001 | 6,20±0,15 р<0,001 | 5,60±0,37 р<0,001 | 6,20±0,63 р<0,005 | 0/5 |
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная, содержащая активное вещество и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером производственный штамм вируса ящура серотипа A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, в эффективном количестве.
2. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
3. Вакцина по п.2, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
4. Вакцина по п.3, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.
5. Вакцина по п.4, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
6. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант-сорбент гидроокись алюминия (ГОА).
7. Вакцина по п.6, отличающаяся тем, что она содержит ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
8. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант сапонин.
9. Вакцина по п.8, отличающаяся тем, что она содержит адъювант сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
10. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит поддерживающую среду.
11. Вакцина по п.10, отличающаяся тем, что она содержит поддерживающую среду в количестве до 1000000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.
12. Вакцина по любому из пп.1-11, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A, ГОА, сапонин и поддерживающую среду в соотношении, мкг.
Концентрированная ГОА-сапониновая вакцина при однократном введении в дозе 1 мл обеспечивала практически 100%-ную защиту скота при экспериментальном заражении общепринятым способом. Выраженный иммунитет наступает на 10-14 день и достигает максимума через 3-4 недели после вакцинации. Иммунитет у взрослых животных длится 6-12 месяцев. Ревакцинация значительно усиливает иммунитет. При широкой профилактической вакцинации крупный рогатый скот обычно ревакцинируют 1 раз в год, свиней - два раза. ВНА в сыворотке крови появляются к концу первой недели, достигают максимального титра в 3-5 недель, затем их концентрация постепенно снижается. ВНА быстрее появляются и достигают пика после введения сорбированных вакцин, однако после применения эмульгированных вакцин титр антител выше и они сохраняются дольше. Колостральный иммунитет хорошо выражен, антител"а у телят сохраняются в течение 5 мес, хотя пассивная защита продолжается до 3 мес.
Материнский иммунитет может подавлять эффект вакцинации у молодняка, поэтому вакцинацию телят при систематической вакцинации коров начинают с 3-4 месячного возраста. Однако имеются доказательства, что телята отвечают на вакцинацию в месячном возрасте или раньше.
Возникновение и течение ящура в неблагополучной зоне в значительной мере определяются групповым иммунитетом. Если уровень иммунитета в популяции естественно восприимчивых видов животных превышает 75%, заболевание будет под контролем, хотя такие меры, как контроль за импортом скота, карантин и локальный убой скота в неблагополучном пункте являются эффективными.
Инактивированные вакцины могут быть моно- или поливалентными, то есть содержать антигены одного или нескольких типов, подтипов и вариантов вируса. При изготовлении поливалентных вакцин количественное соотношение вирусных антигенов необходимо определять с учетом их иммуногенности.
Одновременная вакцинация крупного рогатого скота против ящура и чумы оказалась возможной. Если инактивированную поливалентную ГОА-вакцину против ящура и живую - против чумы вводить одновременно подкожно в область шеи с разных сторон, то образуется такой же иммунитет, как и при раздельной вакцинации против каждого заболевания. Исследования и разработки в области специфической профилактики ящура достигли высокого уровня.
Инактивированные противоящурные вакцины являются высокоэффективными препаратами, а технология их изготовления основывается на самых современных достижениях биологической науки. Успех и изготовление инактивированных противоящурных вакцин могут быть использованы в качестве прототипных решений в исследованиях и разработках инактивированных вакцин против других заболеваний человека и животных.
Остается неясным вопрос, могут ли современные инактивированные вакцины защищать животных от латентного инфицирования в эндемичных по ящуру регионах. Если нет, то какими они должны быть для достижения указанной цели.
Большой интерес представляют сведения о том, что у вакцинированных свиней после экспериментального заражения при отсутствии клинических признаков болезни вирус обнаруживали в достаточно высокой концентрации в полости рта в течение нескольких недель. Наличие его в ротовой полости находится в прямой зависимости от уровня иммунитета. О приживлении вируса в организме вакцинированных животных свидетельствовало также резкое нарастание титра ВНА. Большой научный и практический интерес представляет выяснение места размножения вируса у таких животных.
Живые вакцины против ящура не разработаны. Многочисленные попытки в этой области не дали положительных результатов. Аттенуированные штаммы, как правило, оказывались или слабоиммуногенными, или реверсибельными. В этом отношении вирус ящура существенно отличался от вируса полиомиелита, аттенуированные штаммы которого успешно применяют для пероральной иммунизации человека. Причина этих различий неизвестна. Возможно, что она заключается в различном патогенезе этих заболеваний. Полиомиелит, как и многие вирусные заболевания, имеет сложный патогенез. Для их возбудителей характерно первичное место репликации с последующим проникновением в один или несколько органов-мишений. У полиовируса первичным местом размножения является кишечник, вторичным - центральная нервная система. Такие вирусы, по-видимому, относительно легко могут быть аттенуированны с помощью селективного изменения тропизма в отношении вторичных органов-мишений. В отличие от них, вирус ящура, как, впрочем, возбудители ряда других топикальных инфекций, практически не имеют вторичного органа-мишени. Получение аттенуированных иммуногенных штаммов против таких заболеваний, вероятно, требует иных подходов и представляет более сложную задачу.
Риновирус лошадей 1 по ряду свойств ближе стоит к афтовирусам, чем к другим пикорнавирусам. Некоторые штаммы этого вируса могут вызывать виремию системное заболевание лошадей с респираторным синдромом. Вирус может выделяться с фекалиями. Средства специфической профилактики не разработаны.
Ящур (Aphtae epizooticae) - острая, чрезвычайно контагиозная вирусная болезнь свойских и диких парнокопытных животных, которое характеризуется кратковременной лихорадкой, развитием афтозноерозийных сутокажений на слизистой оболочке ротовой пустоты, бесшерстных участках кожи венчика, межкопытной щели и вымени. На ящур может болеть человек.
Историческая справка. Первое сообщение о заболевании животных на ящур было сделано в 1546 г. в Итали Д. Фракастро. В 1764 г. норвежский исследователь Сагар на основе своих наблюдений указал на контагиозность этой болезни. Вирусная етіологія ящуру была установлена Леффлером и Фрошем (1897), более поздний Хеккером (1899). Множественность типов (плюралітет) возбудителя обнаружили Валле и Карре (1922), которые объясняло этим фактом причину повторного заболевания животных на ящур. В XVI - XIX ст. в многих странах мира ящур неоднократно проявлялся в виде значительных эпизоотий с охватом миллионов животных.
Ныне ящур каждый год регистрируется в многих странах Европы, Ази, Африки и Южной Америки. В Росси ящур установлен в 1881 г. и продолжительное время было стационарной болезнью. В Украине благодаря употреблению широкопланових протиящурних мероприятий и внедрению в практику научных разработок отечественных ученых В. П. Онуфриева, М. В. Рев, А. И. Собко, С. Р. Дидовця, Г. Ф. Бондаренко ящур полностью ликвидирован, однако реальная угроза занесения его из соседних стран еще существует. Ящур наносит значительных экономических убытков, которые состоят из высокой летальности молодняка, которая может достигать 20-50 %, снижение молочной производительности переболевших коров, огромных затрат на проведение суровых карантинных и ветеринарно-санитарных мероприятий.
Возбудитель болезни Ящур - мелкий вирус (диаметром 10-30 нм) из семьи Picornaviridae, что имеет сферическую форму. Состоит из икосаедрального капсиду, одноцепной РНК т 4 структурных белков. Существует 7 типов вируса ящуру - А, О, С, SAT-1, SAT-2, SAT-3 и Азия-1, любой из которых имеет по несколько серологічних вариантов и различается за антигенными и иммунологическими свойствами. После перехворювання животные приобретают иммунитет только к гомологічного вирусу, который не выключает возможности повторного инфицирования новым типом возбудителя яшуру.
В лабораторных условиях вирус яшуру поддерживают на морских свинках и белых мишах-сисунах и в первичных культурах клеток почек телят или сутокосят или перещеплюваній линии ВНК-21 и СПЕВ.
Вирус ящуру чрезвычайно стойкий к влиянию физических факторов и химических веществ. Не разрушается 75 %-г раствором спирта (в отличие от ентеровирусов), эфиром, хлороформом, чотирихлористим углеродом, толуолом, лизолом, фенолом в концентрациях, которые инакти-вируют другие вирусы. Хлорная известь, крезол, сулема разрушают вирус ящуру лишь через несколько часов. В стенках афт вирус может сохраняться на пастбищах к следующему сезону, летом вирус активный в стоящих водоемах 6-12 суток, в сене - С суток, осенью и зимой - 185 -200 суток. В сточных водах остается жизнеспособным на холоде в течение 130 суток, улитку и осенью - 20-49 суток, в гноивцке - до 40 суток, в мерзлом гное - в течение 5 мес. На шерстном покрове скота сохраняется до 50 суток, одежде людей - до 100 суток, в помещениях - до 70 суток. Зимой на стеблях растений остается вирулентным 95 - 100 суток, на поверхности земли - 146-163 суток. В засоленных и копченых продуктах вирус сохраняется до 50 суток, в замороженных продуктах - до 28 суток, мясе - до 8 мес, в лимфоузлах, жире, внутренних органах и костном мозге - до 194 суток, в масле при 5 °С - до 45 суток, в свежем молоке при 37 °С - 12 ч, охлажденному и сохраненному при +4 °С - 15 суток, сухом молоке - до 2 лет, в засоленных шкурах при 15 °С - до 42 суток. Вирус разрушается при 37 °С через 12 ч, при 70 °С - 30 мин, в молоке при 65 °С - через С мин, при 70 °С - 15 мин, при 80 - 100 °С - за несколько секунд. При биотермичном обеззараживании гноя вирус гибнет на глубине С - 40 см через 6 суток, в более поверхностных пластах - через 10-15 суток. Вирус мгновенно разрушается в кислой среде (рн = 6 и низшее), инактивирується в течение 3 суток молочной кислотой во время созревания мяса и снижение рн до 5,3. Под действием солнечного излучения на пастбище вирус гибнет летом - через 1-14 суток, осенью - через 8-20 суток.
Активно действующими дезинфекционными средствами, которые в течение 10 - С мин обезвреживают вирус ящуру, есть горячий 2 %-и раствор едкого натра или калу, 2 %-и раствор формальдегида, 20 %-и раствор свежо-гашеной извести.
Эпизоотология болезни. К ящуру более восприимчивые КРС и мелкий рогатый скот, свиньи и дикие жвачные. У верблюдов инфекция проходит безсимптомно. Редко болеют на ящур буйволы, верблюды, собаки и коты. Однокопытные животные и птица к ящуру не восприимчивые. В молодых, ослабленных и в особенности у новорожденных животных перебежал ящуру более злокачественный, чем у взрослых животных. Случаи заболевания на ящур людей случаются нечасто, преимущественно среди детей после употребления в пищу сырого молока от больных коров. Источником возбудителя инфекции являются больные свойские животные, которые начинают выделять вирус в инкубационный период и в особенности в значительном количестве во время клинического проявления болезни. В условиях отгонного животноводства источником возбудителя болезни могут быть дикие жвачные (сайгаки, антилопы), среди которых ящур нередко приобретает характер эпизоотии и распространяется на большие территории. В внешнюю среду вирус выделяется с слюной, обрывками афт, молоком, мочой, калом больных животных. С молоком вирус начинает выделяться за 7 суток к проявлению клинических признаков, с слюной и спермой - за 4 суток. Большинство секретов и екскретов есть заразными в течение 4-5 суток болезни, слюна - 11 суток. Близко 50 % животных, которые выздоровело, остаются вірусоносіями в течение 8 мес, отдельные животные - до 2 лет.
Заражение ящуром происходит вследствие контакта с больными животными, а также через контаминирлваные вирусом корма, одежда и обувь людей, мясные продукты, сырье животного происхождения, транссутоктные средства. За определенных метеорологических условий (ураган) вирус ящуру может переноситься на большое расстояние, внезапно спричинюючи болезнь за тысячи километров от неблагополучного пункта. Отмечены случаи занесения возбудителя ящуру на большое расстояние пассажирами самолетов и поездов, которые прибывают из неблагополучных относительно ящуру территорий, не придерживаясь требований карантинных ветеринарно-санитарных правил. Определенную роль в распространении возбудителя ящуру могут отыгрывать птицы, собаки, коты, грызуны, насекомого, клещи. Значительную опасность относительно распространения ящуру составляет не обеззараженное молоко, а также озадки, которые поступают из молокозаводов для скармливания сутокосятам и телятам, пищевые и боенские отходы при откорме свиней. Факторами передачи вируса ящуру могут быть контаминированы возбудителем пастбища, водопои, мясокомбинаты, молокосливные пункты, станции погрузки и разгрузка скота, автотранссутокт, трасы для перегона животных, ярмарки, рынки, а также люди, которые находятся в епизоотологичной зоне. Спонтанное заражение чувствительных к ящуру животным происходит через слизистые оболочки травного канала во время приема корма и воды, загрязненных выделениями больных и переболевших животных-вирусоносителей. В организм восприимчивых животных вирус ящуру может проникать также через слизистые оболочки носа, рта, внешних половых органов, конъюнктиву глаз, сосковые каналы вымени и сквозь поврежденную кожу.
Ящур всегда имеет тенденцию к быстрому распространению на больших географических территориях и проходит в виде эпизоотий и панзоотий. Характерным признаком ящуру есть чрезвычайно высокая контагиозность, почти 100 %-ое заболевание восприимчивых животных и довольно низкая летальность, которая составляет для большого рогатого скота 1,2 %, свиней - 8,3 %, овец - 0,78 %. Тем не менее при злокачественной форме болезни летальность молодняка может достичь 90 %. Продолжительность вспышки ящуру не превышает 21-30 суток. В случае проявления ящуру среди большого рогатого скота могут заболевать и другие виды животных, которые содержатся в хозяйстве.
При естественном ходу ящуру отмечается периодичность вспышек эпизоотий через каждые 5-7 лет, что предопределяется обновлением стада за счет новорожденного молодняка и постепенной потерей иммунитета у взрослых животных, приобретенного вследствие предшествующего переболевания. Проведение прививок и широкопланових противоэпизоотических мероприятий существенным образом влияет на закономерности возникновения и проявления этой очень опасной болезни животных.
Патогенез . На месте первичного проникновения вирус чрезвычайно быстро репродуцируется и уже через 24-36 ч образовывает первичные афты, которые часто остаются незамеченными. Отсюда с кровью и лимфой вирус разносится по всему организму, спричинюючи вирусемию и образование вторичных афт на слизистой оболочке ротовой пустоты, пятачка свиней, на коже сосков, вымени, венчику, межкопытной щели и основе рога. Иногда вирус репродуцируется в саркоплазме мышечных волокон миокарда и скелетных мышцах. В некоторых случаях вирус ящуру проявляет пантропные свойства и сутокажает паренхиматозные органы, нервную систему, железы внутренней секреции, которая предопределяет общую инфекцию, высокую температуру и развитие характерных симптомов болезни. У телят, сутокосят и ягнят раннего возраста развивается вирусемия, которая большей частью не сопровождается образованием афт, но приводит к быстрой гибели животных.
Клинические признаки и течение болезни Ящур.
Инкубационный период длится 2-7 суток. Перебежал болезни всегда острый. У Большого рогатого скота Различают доброкачественный и злокачественную формы болезни. При доброкачественной форме ящуру первым признаком болезни есть ухудшение аппетита и замедленное пережевывание жвачки. Потом появляется горячка (до 40,5-41,5 °С), ускорение пульса и дыхание, отказ от корма, резко снижается надой молока. В начале горячки слизистая оболочка рта сухая, горячая и гиперемирована. Через 2-3 суток на слизистой оболочке ротовой пустоты, языку, крыльях носа, а иногда и на носовом зеркальце появляются пузырьки (афты), сперва незначительные, размером с горошину, наполненные сначала прозрачной, а потом мутной жидкостью. Со временем афты увеличиваются к размерам греческого ореха, сливаются между собою, образовывая большие афты, которые разрываются, освобождая лимфу, которая смешивается с слюной и выделяется из рта. На месте разорванных афт получаются мучительные эрози с неравными краями, которые в течение следующих 5-8 суток укрываются эпителием и заживляются. В период горячки и появления афт и эрозий наблюдаются сильное слюнотечение, жажда, трудность во время приема корма и жвачки, характерный «прищелкивание». Кроме слизистой оболочки рта, афты могут получаться на коже венчика и межкопытной щели, на сосках вымени. Сутокажение кожи концовок предопределяет хромание и напряженную походку. При условиях стойлового удержания и достаточного количества сухой подстилки сутокаженные участки заживляются через 7-12 суток. Продолжительные перегоны животных, удержание их в сырых, загноенных помещениях могут привести к осложнениям зажигательных явлений вторичной микрофлорой, развития артритов или панариция. При сутокажении вымени на сосках обнаруживаются разной формы и размеров афты, эрозии, струпья, которые предопределяет трудности в здаиваннии молока, изменение его качества. Молоко становится слизистой, имеет горьковатый привкус. При старательном уходе и своевременном лечении сутокаженные участки вымени быстро заживляются, в другом случае возможное осложнение секундарною микрофлорой. Во всех случаях, независимо от сутокажения вымени, переболевание на ящур очень отрицательно влияет на производительность коров, снижение надоев молока по стаду может при этом достигать 50-75 %. Восстановление молочной производительности происходит медленно и затягивается иногда до 14 мес и большее (И. И. Лукашов, 1963). Во время болезни у беременных коров могут произойти аборты, задержка последа, рождение мертвых или слабых телят. При злокачественной форме ящуру кроме афтозно-ерозийных сутокажений слизистых оболочек и кожи наблюдается нарушение функции сердечно-сосудистой системы, слабость, сильное общее угнетение, клонічні судороги, одышка, хрипы. Эта форма ящуру предопределяет очень высокую летальность, которая составляет среди большого рогатого скота 50-70 %, коз - 100 %, свиней - 21,8 % (Г. Бондаренко).
У Телят К 2-месячному веку ящур проходит в безафтозній форме, характеризуется явлениями острого геморагичного гастроентериту, сепсиса и миокардитом. Наблюдаются лихорадка, судороги, слабость, нежелание сосать молозиво, сильная депрессия. Больные телята гибнут в первые 12 - С ч болезни. Летальность может достичь 60 %.
У Овец При ящуре чаще сутокажаются концовки и вымя, афты в ротовой пустоте получаются редко. Слюнотечения не бывает. У больных овец наблюдается кратковременная лихорадка, отказ от корма, замедленная жвачка, сильная хромота, чаще на передние концовки. Болезнь длится близко 2 недель, большей частью заканчивается выздоровлением. Ягнята Болеют очень тяжело, преимущественно вбезафтозной форме, с сутокажением центральной нервной системы, явлениями острого гастроентериту. У Коз Чаще сутокажается слизистая оболочка ротовой пустоты и концовки, редко вымени. Больные животные придавлены, большее лежат, тяжело передвигаются, хромают. Саливация выражена слабо. В ротовой пустоте, на нижней губе, в уголках губ обнаруживаются мелкие афты и эрозии. Нередко у заболевших коз в начале болезни наблюдается засуток, который изменяется проносом с слизью и прожилками крови. Выздоровление наступает через 10-14 суток.
У Свиней Ящур сопровождается трясучкой, угнетением, снижением аппетита, афтозно-ерозийными сутокажениями венчика, копыт, образованием афт на пятачку т вымени, очень редко - в ротовой пустоте. Больные свиньи преимущественно лежат, передвигаются ползком, на запястных суставах. Иногда наблюдается спадание копыт. Продолжительность болезни - 8-25 суток. У Сутокосят Перебежал болезни злокачественный, с высокой температурой, признаками тяжелого гастроэнтериту, иногда многочисленными афтами на пятачке и слизистой оболочке ротовой пустоты. Гибнет до 60-80 % больных сутокосят.
У Оленей Наблюдается пронос, афтозно-ерозийное сутокажение слизистой оболочки ротовой пустоты т кожи концовок. Болезнь длится 10-12 суток, потом наступает выздоравливания.
У Верблюдов Отмечается сутокажение слизистой оболочки рта и кожи концовок. Слюнотечения не бывает. Перебежал болезни доброкачественный.
У Человозраста Ящур может возникать при употреблении в пищу сырого молока от больных животных, а также в случае нарушения правил личной гигиены во время их обслуживания и лечение. Заражение происходит через слизистые оболочки и поврежденную кожу. Наблюдается общая слабость, головная боль, повышение температуры тела до 39,5-40,2 °С, слюнотечение. В роте определяется сильная болезненность, покраснение ясень и языка, образование на внутренней поверхности щек, языке и десне пузырки размером от просяного зерна к горошине иd лесного ореха с мутным ексудатом. Со временем болезненность в роте усиливается, человек не может есть и пить. Через 24-36 ч пузырьки лопаются, возникают многочисленные, соединенные между собою мучительные эрози. В первые 2-3 суток болезни возможные засуток, которые изменяются проносами. У Детей Перебежал болезни более злокачественный, ящурни пузырьки могут получаться не только в ротовой пустоте, а и на слизистой оболочке носа, конюнктиве глаз, в межпальцевых промежутках на руках и ногах, на голени и предплечье. Заболевание длится 7-10 суток. Иногда наблюдается так называемый «ящурний панариций», что заканчивается отпадением ногтей. Возможные осложнения болезни бронхопневмонией, гастроентеритом. Прогноз зазвичай благоприятный.
Патологоанатомические Изменения. При разрезе трупов животных, которые погибли от ящуру, обнаруживается острое катаральное воспаление слизистой оболочки ротовой пустоты, глотки и дыхательных путей, в молодняка раннего возраста - геморагическое воспаление кишечника и перерождение миокарда. Характерными являются афты, эрозии и язвы, которые наблюдаются на бесшерстных участках кожи, слизистых оболочках ротовой пустоты, кишечника, дыхательных путей, а также на вымени. Афтозний процесс на вымени нередко объединяется с серозно-катаральным маститом, а при осложнениях - гнойным маститом.
Регионарные лимфоузлы увеличенные, сочные, осередково или дифузно гиперемированы. В случае злокачественного хода ящуру патологоанатомические изменения проявляют также в сердечной мускулатуре - дегенеративные и некротичные, разной формы и размеров желто-серые ячейки, белые полосы и тяжі на сердце, которые предоставляют нему пятнистого вида («тигровое сердце»), бледность и вялость сердечной мышцы. Многочисленные ячейковые дистрофические и некротичные сутокажения обнаруживаются также в мышечных волокнах мускулатуры передних и задних концовок, спины, межреберных и жевательных мышц и мышц языка. Отмечаются дистрофия и ячейковый некроз в печени и нырках, гиперемия и отек легких, гиперплазия лимфоузлов. Посмертные изменения в ротовой пустоте при злокачественном ящуре выраженные слабо или их может совсем не быть. У телят, сутокосят и ягнят обнаруживаются геморагичный гастроентерит, дегенеративные изменения в печени, скелетных мышцах, иногда «тигровое сердце». У других видов животных патологические изменения при ящуре подобные к описанных у большого рогатого скота.
Диагноз Устанавливают на основании характерной клинической картины, епизоотологических данных, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. В лабораторию присылают не менее чем 5 г стенок и содержимого афт (без признаков распада), отобранных с слизистой оболочки языка большого рогатого скота, из пятачка свиней, а также с кожи венчика и міжпальцевої щели большого и мелкого рогатого скота, свиней, верблюдов и других животных. В случае отсутствия афт берут кровь больных животных в период повышения температуры тела и кровь животных, которые переболели. От трупов молодняка всех видов отбирают лимфатические узлы председателя и заглоточного кольца, поджелудочную железу и сердечную мышцу. Для ретроспективной диагностики отбирают пробы пищеварительно-глоточной слизи. Патологический материал вмещают в флаконы с притертыми пробками и не более поздний чем через 6-12 ч из момента отбора доставляют в лабораторию для исследования. В случае невозможности доставки в указанный срок пробы замораживают или консервируют в глицерин-фосфатном буфере (рН = 7,4-7,6).
Лабораторная диагностика. Предусматривает выявление и идентификацию специфического типичного и вариантного антигена вируса ящуру непосредственно в патологическом материале, полученном от животных с клиническими признаками болезни; изоляцию и индикацию вируса с помощью биопроби на белых мышатах и морских свинках или зараженных первичных культур клеток почек телят и сутокосят ли перещеплюваної линии ВНК-21, а также проведением биопроби на большом рогатом скоте; идентификацию вируса с помощью РЗК, РДП, ІФА, РН (в культуре клеток методом перекрестного иммунитета на большом рогатом скоте, морских свинках и вакцинированном рогатом скоте). В лаборатории патологический материал немедленно исследуют за РЗК, РДП, РНГА (с антитильным еритроцитарним диагностикумом) и ELISA-тестом для выявления ящурного антигена и его типизации. Одновременно суспензией патологического материала заражают первичные культуры клеток почек телят или сутокосят, перещеплювану линию ВНК-21. В случае наличия вируса ящуру через 1-3 суток появляется ЦПД. Специфичность клеточной дегенерации контролируют за РЗК.
Для проведения биопробы используют 10 мышат 4-6-дневного возраста и 5 морских свинок, а в случае потребности проводят заражения 2 животных большого рогатого скота 18-месячного возраста и 4 сутокосят 3-месячного возраста. Через 2-3 суток в месте инокуляции инфекционного материала появляются афты. Для подтверждения специфичности кожных сутокажений осуществляют их отбор, изготовление суспензии и исследование за РЗК. Результаты исследования на ящур считают отрицательными в случае отсутствия гибели белых мышей, а также ящурного антигена в исследуемых за РЗК суспензиях.
Для определения типов вируса ящуру в стенках и содержимом афт больных на ящур животных, а также в вирусовмесных суспензиях из культур клеток и мышечной ткани инфицированных кролей и мышат применяют реакцию косвенной гемаглютинации. Определение типов вируса ящуру в патологическом материале и изучение антигенных свойств епизоотических штаммов осуществляют с помощью реакции имунодифузии. Ретроспективную диагностику ящуру проводят путем выявления и типичной идентификации специфических антител в сыворотках крови переболевших животных за РН, РНГА, РДП, РІФ и реакции серозахисту на белых мышатах 4 - 6-дневного возраста.
Дифференциальная диагностика. Предусматривает необходимость отличать ящур от других заболеваний с везикулярным синдромом. В и - спас Коров Сопровождается стадийностю развития оспенной екзантеми кожи: розеола, папула, везикула, пустула, круста. Уражуються только соски и вымя. В случае необходимости проводят микроскопию мазков из свежих папул для выявления элементарных телец и заражения куриных эмбрионов. Чума Большого рогатого скота Уражує лишь один вид животных, служит причиной высокой смертности. На слизистой оболочке ротовой пустоты никогда не бывает афт, не уражуються концовки и вымя. Заболевание часто сопровождается проносами. Проводят выделения вируса в культуре клеток, выявление специфического антигена и специфических антител с помощью РЗК и РОД; ставят биопробу на морских свинках и телятах (морские свинки к вирусу чумы не чувствительные). Везикулярный стоматит уражує не только Большой рогатый скот, А и Коней И Ишаков, На которые по потребности ставят биопробу. Проводят заражения чувствительных к вирусу везикулярного стоматита белых мышей. Некробактериоз есть хроническим заболеванием многих видов животных, проходит в виде энзоотии. Афты при этом заболевании не получаются, обнаруживаются сутокажение не только миокарда, а и печени и преджелудоков. При бактериологическом исследовании выделяют анаеробний микроб. В и - русна диарея характеризуется медленным развитием энзоотии, сутокажает лишь большой рогатый скот, преимущественно возрастом от 6 мес к 2 лет, характерным есть водянистый пронос. Выделяют вирус диареи, которая типують с помощью РН, РОД, РІФ. Везикулярная болезнь Свиней Случается лишь у этого вида животных, летальность невысокая. Возбудитель болезни очень стойкий в кислой среде (рН = 3,0-5,0) и за комнатной температуры, тогда как вирус ящуру в этих условиях полностью інактивується. К ентеровирусу стойкие морские свинки, белые мыши, кроли. Окончательный диагноз устанавливают по результатам РЗК, РОД и РІФ. В случае необходимости ставят биопробу на разных видах сельскохозяйственных животных. Везикулярную екзантему Свиней Можно дифференцировать от ящуру биопробою на морских свинках, за РЗК с везикулярной жидкостью и специфическими гипериммунными сыворотками. Применяют также РН в культуре клеток. Катаральная лихорадка Овец Характеризуется сезонностью, отсутствием контагиозности, а также специфических афтозних сутокажений слизистой оболочки ротовой пустоты, кожи, концовок. При везикулярном стоматите незаразной етиологии не бывает горячки и афт.
Лечение Ящура.
Больных животных обеспечивают мягким питательным кормом, гигроскопической мягкой подстилкой (торф, тирса), чистыми сухими помещениями, доброкачественной питьевой водой с добавкой 1 г медного кусутокоса на ведро холодной воды. Для специфического лечения используют протиящурну сыворотку реконвалесцентов (1,0- 1,5 мл на 1 кг массы животного), для молодняка - имунолактон (сутокосятам, ягнятам, телятам к 3-месячному веку - 1 г; возрастом свыше 3 мес - 0,2 г на 1 кг массы животного), а также иммуноглобулин (телятам - 5-10 мл на председателя, ягнятам и сутокосятам - 2 мл на председателя). В зависимости от клинического проявления болезни проводят симптоматичное лечение. Ротовую пустоту 2-3 разы на день промывают слабыми дезинфекционными и вяжущими растворами: 2 %-г раствором уксусной кислоты, перманганата калия - 1: 1000, фурацилину - 1: 5000, 2 %-г раствором борной кислоты, 2 %-г раствором алюминиевых галунов. Эрозии смазывают йодглицерином. В случае осложнений на концовках рекомендуется вводить в подкожную артерию бедра 500 000 ОТ пенициллина в 100 мл 0,5 %-го раствора новокаина (А. Ф. Бурденко), а при сутокажении вымени - в внешнюю клубову артерию 500 000 ОТ стрептомицина в 150 мл 0,5 %-го раствора новокаина. Сутокаженные участки кожи на концовках очищают от грязи и смазывают рыбьим жиром пополам с дегтем или эмульсиями антибиотиков. Полезно также каждый день осуществлять прогон животных через специальные ножные ванны с 2 %-г раствором формальдегида, 0,5 %-г раствором едкого натра, 2-3 %-вою эмульсией креолина или лизола. Желательно периодически обрабатывать копыта, кожу венчиков и межпальцевой(межкопытной) щели сосновым дегтем пополам с рыбьим жиром. При тяжелом ходу ящуру применяют сердечные средства.
Иммунитет. После переболевания на ящур у животных развивается стойкая невосприимчивость к повторному заражению одним и тем самым типом и вариантом вируса сроком от 1 до 10 лет. Однако в случае появления ящуру другого типа животные могут заболеть повторно. Раньше считали, что иммунитет при ящуре стерильный. В последние годы доказаны наличие персистенции вируса ящуру в организме переболевших животных вдоль одного года и дольше.
Для активной иммунизации против ящуру предложен моно - и поливалентные вакцины с лапинизованого вируса А, О, С і А48; моно - и поливалентные сорбовани вакцины из вируса О, А і С, которые выращивают на эпителии языка большого рогатого скота; моновалентные вакцины против ящуру типа А, О, С и Азия-1; эмульсионную моновалентну вакцину против ящуру типа А22 или О1 для прививки свиней. Вакцины применяют для иммунизации против ящуру разных видов восприимчивых животных с профилактической и вынужденной целью в угрожающей зоне и неблагополучных пунктах.
Большой рогатый скот, оленей, овец, коз, яков И Буйволов В зонах систематического применения вакцины щеплюють с профилактической целью единовременно. Молодняк, родившийся от иммунизированных животных, вакцинируют после исчезновения у него лактогенного пассивного иммунитета. Ревакцинацию взрослого поголовья и молодняка осуществляют в соответствии с инструкцией по использованию любой из предложенных вакцин. В угрожающих зонах, где раньше скот не вакцинировали против ящуру, и в неблагополучных пунктах животных разных вековых групп, которые не имеют признаков заболевания на ящур, щеплюють единовременно независимо от срока предшествующей вакцинации. В хозяйстве, где раньше вакцину не применяли, всех животных независимо от возраста, а также молодняк, который родился в течение месяца в неблагополучном пункте, щеплюють двукратно с интервалом 10-20 суток.
Ревакцинацию взрослого поголовья проводят через каждые 6 мес, молодняка - через 3 мес к 18-месячному веку. Для иммунизации Свиней Предложена эмульсионную моновалентну вакцина против ящуру типа А22 или О1. Применяют вакцину для иммунизации свиней с профилактической целью в угрожающих и неблагополучных относительно ящуру хозяйствах с учетом типичной принадлежности вирусу ящуру. Сутокосят, родившихся через 25 суток и большее после вакцинации свиноматок, не щеплюють. В случае сохранения угрозы возникновения ящуру их имунизируют из месячного возраста. Свиней вакцинируют единовременно в веку 3-7 мес. В неблагополучных и угрожающих относительно ящуру хозяйствах свиней независимо от возраста ревакцинують единовременно через 6 мес.
В последние годы разработаны высокоактивные инактивированые вакцины нового поколения, которые обеспечивают защиту животного от ящуру через 2-3 суток после прививки.
Профилактика и Мероприятия борьбы с Ящуром.
В нашей стране в течение последнего десятилетия заболеваний животных на ящур не наблюдалось. Однако существует большая достоверность занесения ящуру из неблагополучных относительно этого заболевания государств, с которыми постоянно поддерживаются межгосударственные и хозяйственные связи. Поэтому руководители хозяйств разных форм собственности и специалисты ветеринарной медицины обязанные систематически проводить профилактические мероприятия по ящуру и быть хорошо проинформированными об эффективных методах борьбы с этой болезнью.
В случае возникновения подозрения относительно заболевания животных на ящур нужно немедленно определить точные границы ячейки ящуру, неблагополуч-ного пункта и угрожающей зоны и организовать проведения соответствующих противоэпизоотических мероприятий. Протиящурные мероприятия предусматривают введение суровых охранно-карантинных ограничений, осуществление профилактической вакцинации и обеззараживания вируса в внешней среде. В случае угрозы занесение ящуру в благополучные зоны решающее значение имеют жесткие охранительные мероприятия, направленные прежде всего на полное прекращение любых хозяйственных или административно-общественных связей с зоной распространения ящуру. Необходимая широкая разъяснительная работа среди работников животноводства и населения об опасности ящуру, пути его занесения и профилактики.
В хозяйствах угрожающей зоны запрещается доступ на их территорию посторонних лиц и транссутокта. В случае крайней потребности доставки на неблагополучную территорию продуктов питания, кормов и медикаментов на границе зоны организовывают перевалочные пункты, где осуществляют необходимую ветеринарно-санитарную обработку людей и транссутокта. В угрожающей зоне для ухода за животными закрепляют постоянные бригады, устанавливают суровый ветеринарный надзор за заготовкой и вывозом скота, животного сырья и ввозом продукции животноводства и сельского хозяйства. В пастбищный период скот выводят в лагеря с постоянно закрепленными за ею надсмотрщиками, запрещается выпас скота индивидуального использования вместе с общественным стадом. Усиливают ветеринарный надзор на трасах прогона и местах торговли скотом, а также на предприятиях по переработке и сохранения животноводческого сырья.
Большое значение в борьбе с ящуром имеет своевременное установлении: диагноза, правильная и быстрая организация ветеринарно-санитарных карантинных и специальных мероприятий в неблагополучной зоне. Неблагополучное хозяйство или населенный пункт немедленно карантируються, вокруг него определяется угрожающая зона. В неблагополучном пункте создается специальная комиссия по борьбе с ящуром, организовываются охранно-карантинном милицейские, гражданские, а в случае потребности и военизированные посты. В сутокядке осуществления карантинных мероприятий в границах неблагополучного пункта запрещаются все перемещения животных, птицы и людей - введение и вывод животных, торговля скотом, выставки, проезд и выезд людей, заготовительные операции, общий выпас, поение и удержание больных животных вместе с здоровыми.
По решению местной власти органов самоуправление устанавливаются круглосуточные охранно-карантинные посты, закрываются все дороги, которые ведут в неблагополучный пункт, с выставлением круглосуточных сторожевых постов и указанием объездных путей и познавательных знаков, которые запрещают проезд транссутокта. Регулярно осуществляется профилактическая дезинфекция животноводческий помещений, территории и транссутокта, который обслуживает фермы. В стойловый период животных неблагополучных относительно ящуру хозяйств оставляют в помещении в условиях суровой изоляции, а в пожилой период удерживают на специально отведенном пастбище, которое закрепляют за гуртом на весь период карантина. Здесь же должны находиться и люди, которые присматривают за животными. Чтобы предотвратить распространению ящуру, в особенности суровый ветеринарно-санитарный контроль устанавливают на скотобазах, мясокомбинатах, бойнях, составах животного сырья, молокозаводах, маслобойных и сыроваренных заводах и других предприятиях по переработке животного сырья.
В случаях первичного возникновения ящуру в благополучной местности, которая находится на большом расстоянии от основной ячейки болезни, рядом с карантинными мероприятиями проводится вынужденный забой всех больных и восприимчивых к ящуру здоровым животным на временной специально организованной забойной площадке с соблюдением всех ветеринарно-санитарных правил и следующей тщательной дезинфекцией. В случае выявления первых случаев заболевание на ящур больных и подозреваемых относительно заболевания животных немедленно изолируют и лечат. В случае массового заболевания скота на ящур больных животных не выделяют, а оставляют в общем изолированном помещении и лечат. Всех клинически здоровых восприимчивых к ящуру животным карантинованой и угрожающей зон после установления типа вируса ящуру вакцинируют. Территорию ящурного ячейки, животноводческие помещения, скотные дворы и вещи ухода за животными каждый день дезинфицируют. Молоко, которое получают от коров с ящурного ячейки, перерабатывают на топленое масло. Трупы животных, которые погибли в ящурному ячейки, сжигают или зарывают в траншеи на территории неблагополучного хозяйства. Гной, остатки корма и подстилку каждый день вывозят на специально отведенное место для биотермичного обеззараживание и используют не раньше, чем на 30-ту сутоку из момента закладывания. Гной, который сохраняется зимой в замороженном состоянии, после оттаивания весной также поддают биотермичному обеззараживанию. Участка пастбищ, где выпасали больные животные, скотопрогонны тракты, которыми прогоняли больной скот, могут быть открытые для выпасы и прогона скота летом не раньше чем через 1 мес, а для вакцинированных животных - через 2 недели после вакцинации.
Карантин из неблагополучного относительно ящуру пункта снимается через 21 сутоку после последнего случая выздоровления животного и проведение тщательной окончательной дезинфекции. Вывоз скота, которая переболел на ящур, для забоя разрешается после снятия карантина. Вывоз в благополучные хозяйства для племенных целей или продажи на рынках переболевших на ящур или вакцинированных против ящуру животных разрешается не раньше чем через 12 мес после снятия карантина. В течение следующих двух лет в границах неблагополучного пункта и угрожающей зоны систематически проводят вакцинацию животных против ящуру.
Для дезинфекции во время вспышки ящуру применяют горячий 2 %-и раствор едкого натра, 1 %-и раствор формальдегида, раствор хлорной извести, которая содержит 2 % активного хлора, 5 %-и раствор хлорида йода; горячий 3 %-и раствор каустификованой содо-поташной смеси - единовременно, во время окончательной дезинфекции - двукратно. Подлогу, проходы, сточные желоба каждый день посыплют свежегашеной известью в сутокошка, стены белят 20 %-ой смесью свежегашеной извести, кормушки дезинфицируют 2 %-г раствором едкого натра. Мелкий инвентарь и предметы ухода за животными погружают на 1 ч в 2 %-и раствор едкого натра, 1 %-и раствор формальдегида, просветленный раствор хлорной извести, которая содержит 2 % активного хлора. Дезинфекционные барьеры заполняют 2 %-г раствором формальдегида, 3 %-г раствором едкого натра, 5 %-вою эмульсией дезинфекционного креолина, 4 %-вою эмульсией ксилонафту, раствором хлорной извести, которая содержит 2 % активного хлора. Окончательную дезинфекцию помещений разрешается проводить аэрозольным методом, используя 20 %-и раствор формальдегида из расчета 20 мл на 1 м3 помещение при экспозиции 3 ч, а также смесь с 3 частей формалина и 1 части креолина или ксилонафту из расчета 15 мл на 1 м3 помещение при экспозиции 3 ч.
Защита человека от заболевания на ящур. Предусматривает соблюдение правил личной гигиены во время ухода за больными на ящур животными. Потребление в неблагополучных пунктах молока и мяса разрешается лишь после их обеззараживания. Во время лечения больных на ящур людей рекомендуется постельный режим и легкая молочно-растительная диета. Не следует употреблять никаких жаропонижающих средств. В случае сильной головной боли применяют небольшие дозы пирамидона с фенацетином, кофеином, люминалом. Для местного лечения целесообразно многократно прополаскивать рот растворами борной кислоты, перманганата калия. Эрозии на ногах и руках смазывают ихтиоловой мазью и разными антисептическими эмульсиями.
